Principio di colorazione
Gram staining all bacteria can be divided into gram-positive bacteria (G + ) and Gram-negative bacteria ( G - ) two categories, is the most commonly used bacteriological staining identification. The reason for staining bacteria can be divided into G + bacteria and G - bacteria, is generally believed that because the Gram stain is based on special chemical components of bacterial cell walls were stained of.
e mediante mordente dopo la trasfezione iniziale, le cellule formano un complesso iodio-violetto macromolecolare macromolecolare insolubile in acqua. A causa del contenuto di peptidoglicano spesso della parete cellulare dei batteri gram-positivi e del grado più elevato di molecole di reticolazione che più strettamente, in modo che quando eluito con etanolo, la disidratazione delle cellule del peptidoglicano a causa della significativa contrazione, unita al suo contenuto sostanzialmente lipidico, non può essere dissolta in un le pareti della fessura dell'etanolo, quindi, il cristallo viola e il complesso di iodio rimangono fermamente ritenuti nella parete cellulare, presenta viola. Batteri Gram-negativi a causa della parete sottile e del basso contenuto di peptidoglicano reticolato sciolto, in modo che dopo il caso dell'etanolo, la maglia del peptidoglicano sia difficile da restringere e, insieme al suo alto contenuto lipidico, quindi dopo quando il lipide è stato dissolto in etanolo, il grande divario apparirà nella parete cellulare, il complesso della parete cellulare è stato facilmente eluito, quindi dall'etanolo dopo lo sbiancamento e le cellule incolori. Quindi di nuovo i batteri Gram-negativi colorati di rosso avranno un nuovo strato di colore: rosso, mentre i batteri Gram-positivi sono ancora viola.
flusso operativo
Il metodo di colorazione di Gram comprende generalmente quattro passaggi Primo colorante, mordente, sbiancante, macchiato e metodi operativi specifici sono:
(1) produttori.
gli strisci convenzionali prelevati dalla coltura del seme sono stati essiccati, fissati.
utilizzo della crescita attiva di colture giovani come colorazione di Gram; lo striscio non deve essere troppo spesso, per evitare un risultato falso positivo di sbiancamento incompleto; Fiamma di fissaggio non surriscaldata (calda non idonea a scorrere).
(2) Primo colorante.
cristal violetto è stato aggiunto goccia a goccia (per coprire solo la pellicola di pellicola appropriata) macchiando 1-2 minuti, lavato con acqua.
(3) mordente.
ai residui utilizzando acqua di iodio lavata e trattata con copertura di iodio circa 1 minuto, lavaggio con acqua.
(4) sbiancamento.
acqua residua su una carta da filtro per aspirare il vetrino, vetrini inclinati, su sfondo bianco, con un contagocce sbiancamento del flusso di etanolo più etanolo al 95% fino all'assenza di effluente viola, immediatamente lavato con acqua.
lo sbiancamento con etanolo è la chiave per le operazioni di colorazione di Gram: mancanza di sbiancamento, i batteri falsi negativi sono batteri positivi colorati; sbiancamento eccessivo, i batteri falsi positivi sono batteri tinti-negativi. Pertanto il tempo di sbiancamento è generalmente di 20-30 secondi.
(5) colorazione di contrasto.
sono stati colorati con safranina per circa 2 minuti, lavati con acqua.
(6) esame microscopico.
Dopo l'essiccazione, microscopio ad olio. Le cellule erano colorate di blu-viola per i batteri gram-positivi, tinte di rosso per i batteri gram-negativi.
Specie comune
batteri gram-positivi comuni Staphylococcus (Staphylococcus), Streptococcus (Streptococcus), Streptococcus pneumoniae, Bacillus anthracis, difterite, tetano, ecc.
comuni batteri gram-negativi Shigella, Salmonella typhi, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Bordetella pertussis e Vibrio cholera e meningococcus.
ruolo principale
Il significato della colorazione di Gram risiede nell'identificazione dei batteri, molti dei batteri sono divisi in due categorie, batteri Gram-positivi e Gram-negativi.
nel trattamento della maggior parte dei batteri gram-positivi sono sensibili alla penicillina (Mycobacterium tuberculosis insensibile alla penicillina): la maggior parte dei batteri piogeni appartiene a batteri gram-positivi, in modo che possano produrre esotossina patogena per l'uomo, è possibile scegliere la famiglia delle penicilline, come il ceftriaxone .
I batteri gram-negativi, la maggior parte dei batteri intestinali sono per lo più batteri gram-negativi, che producono endotossine, si basano sull'endotossina che fa ammalare le persone. Batteri Gram-negativi e non sensibili alla penicillina (ma Neisseria meningitidis è meningite meningococcica e gonorrea sensibile alla penicillina), possono essere selezionati fluorochinoloni come norfloxacina, levofloxacina, inoltre si possono scegliere macrolidi come claritromicina, roxitromicina. Quindi, i primi a distinguere tra batteri patogeni sono i batteri gram-positivi oi batteri negativi, l'antibiotico di scelta in termini di grande significato.