Princip barvení
Gram staining all bacteria can be divided into gram-positive bacteria (G + ) and Gram-negative bacteria ( G - ) two categories, is the most commonly used bacteriological staining identification. The reason for staining bacteria can be divided into G + bacteria and G - bacteria, is generally believed that because the Gram stain is based on special chemical components of bacterial cell walls were stained of.
a mořidlem po počáteční transfekci buňky tvoří ve vodě nerozpustný makromolekulární komplex krystalová violeť-jod. Vzhledem k obsahu peptidoglykanu v buněčné stěně grampozitivních bakterií a vyššímu stupni zesíťování molekul, které jsou těsnější, takže při eluci ethanolem, dehydratace peptidoglykanových buněk v důsledku významné kontrakce, spojená s jeho v podstatě obsahujícím lipidem, nemůže být rozpuštěn v ethanolové stěny štěrbiny, takže krystalová violeť a komplex jódu zůstává pevně držen v buněčné stěně, má fialovou barvu. Gramnegativní bakterie se kvůli tenké stěně a nízkému obsahu zesíťovaného peptidoglykanu uvolňují, takže v případě etanolu se peptidoglykanová síť těžko zmenšuje a ve spojení s vysokým obsahem lipidů tak po rozpuštění lipidu v ethanolu se v buněčné stěně objeví velká mezera, komplex buněčné stěny byl snadno eluován, tedy ethanolem po vybělení, a bezbarvé buňky. Pak opět červené barvivo obarvené gramnegativní bakterie získají novou vrstvu barvy - červenou, zatímco grampozitivní bakterie jsou stále na fialové.
provozní tok
Gramova metoda barvení obecně zahrnuje čtyři kroky První barvení, mořidlo, bělení, barvení a specifické provozní metody jsou:
( 1) výrobci.
konvenční nátěry odebrané semenné kultury byly vysušeny, fixovány.
využití aktivního růstu mladých kultur jako Gramova barviva; nátěr by neměl být příliš hustý, aby nedošlo k falešně pozitivnímu výsledku neúplného bělení; fixační plamen se nepřehřívá (horký není vhodné klouzat).
(2) První barvivo.
krystalová violeť byla přidána po kapkách (aby se pouze pokryl vhodný pelikulový film), barvení 1-2 min, promyto vodou.
(3) mořidlo.
do zbytků pomocí jodové vody promyty a ošetřeny jodem pokrytím asi 1 min, promytím vodou.
(4) bělení.
zbytková voda na filtračním papíře k odsátí podložního sklíčka, nakloněných podložních sklíček, na bílém pozadí, pomocí kapátka bělícího proudu ethanolu plus 95% ethanolu, dokud nezmizí purpurový výtok, ihned promyty vodou.
etanolové bělení je klíčem k operacím barvení podle Grama: nedostatek bělení, falešně negativní bakterie jsou obarvené pozitivní bakterie; nadměrné bělení, falešně pozitivní bakterie jsou barvené negativní bakterie. Doba bělení je tedy obecně 20-30s.
(5) kontrastní barvení.
byly barveny Safraninem asi 2 minuty, promyty vodou.
(6) mikroskopické vyšetření.
Po vysušení olejový mikroskop. Buňky byly obarveny modrofialovou grampozitivní bakterií, červeně obarveny gramnegativní bakterie.
Běžné druhy
běžné grampozitivní bakterie Staphylococcus (Staphylococcus), Streptococcus (Streptococcus), Streptococcus pneumoniae, Bacillus anthracis, záškrt, tetanus aj. .
běžné gramnegativní bakterie Shigella, Salmonella typhi, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Bordetella pertussis a Vibrio cholera a meningokok.
hlavní role
Význam barvení podle Grama spočívá v identifikaci bakterií, mnoho bakterií se dělí do dvou kategorií, grampozitivní a gramnegativní bakterie.
při léčbě většiny grampozitivních bakterií jsou citlivé na penicilin (penicilin-necitlivé Mycobacterium tuberculosis): Většina pyogenních bakterií patří ke grampozitivním bakteriím, takže mohou produkovat exotoxin patogenní pro člověka, můžete si vybrat rodinu penicilinů, jako je ceftriaxon .
Gramnegativní bakterie, většina střevních bakterií jsou většinou gramnegativní bakterie, které produkují endotoxiny, spoléhají na to, že endotoxin způsobuje nemocem lidí. Gramnegativní bakterie a není citlivá na penicilin (ale Neisseria meningitidis je meningokoková meningitida a kapavka citlivá na penicilin), mohou být vybrány fluorochinolony, jako je norfloxacin, levofloxacin, také si můžete vybrat makrolidy, jako je klarithromycin, roxithromycin. Takže první, kdo rozlišuje mezi patogenními bakteriemi, jsou grampozitivní bakterie nebo negativní bakterie, antibiotikum volby z hlediska velkého významu.